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WSU-HN30人口腔鳞状细胞
细胞培养说明书
一、细胞培养条件
细胞英文名称 | WSU-HN30 | 细胞中文名称 | 人口腔鳞状细胞 |
形态特性 | 上皮样 | 生长特性 | 贴壁生长 |
培养体系 | DMEM+10%FBS | ||
传代方法 | 1:2--1:4传代 | 传代情况 | 2~3天1次 |
冻存条件 | 细胞库无血清冻存液 | ||
备注 | 收集瓶中培养基,留作过渡培养。 |
二、细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满*培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时。镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的*培养液收集至离心管中,加入6ml*培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。(注意发货的是密封培养瓶的话,处理完后放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松,传代后建议一瓶用原瓶里面的*培养基,另外一瓶用自己配的*培养基)
三、细胞培养步骤
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,*脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右*培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。
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